准备500元给胎儿做地贫筛查可能够了，也可能不够。一般来说，怀孕期间去医院给胎儿做地贫检查的费用大概是四百到七百元之间。因为医院做检查收费情况跟医院等级，地域分布等等都有关系，不同的地区和不同的医院的收费情况是不一样的。通常情况下，公立医院的收费都差不多，私立医院的收费则要高一些，而且价格不等。建议去你产检的医院问一下具体收费是多少。

珠蛋白生成障碍性贫血原名地中海贫血又称海洋性贫血，是一组遗传性溶血性贫血疾病。由于遗传的基因缺陷致使血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状态。

缘于基因缺陷的复杂性与多样性，使缺乏的珠蛋白链类型、数量及临床症状变异性较大。根据所缺乏的珠蛋白链种类及缺乏程度予以命名和分类。本病广泛分布于世界许多地区，东南亚即为高发区之一。

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通常情况下，胎儿地贫筛查是在怀孕12周左右进行，主要是因为胎儿怀孕初期的进行地贫筛查有助增加的结果的准确性。其中，孕检地贫筛查数值标准如下：

1.嗜酸粒细胞比值(EO%)0.057参考范围：0.005-0.05；

2.嗜碱粒细胞比值(BASO%)0.015参考范围：0-0.01；

3.红细胞计数(RBC)6.9参考范围：4.0-5.5；

4.平均RBC体积(MCV)63参考范围：82-95；

5.平均RBC血红蛋白含量(MCH)20.2参考范围：27-31；

6.RBC分布宽度变异系数(RDW-CV)0.156参考范围：0.114-0.145；

7.血小板分布宽度(PDW)23.3参考范围：9-17；

8.RBC压积(HCT)0.335参考范围：0.36-0.43。

怀孕生子本应是件水到渠成的事情，但有些夫妻备孕很久，却迟迟怀不上。其实一对夫妻想要怀孕，需要满足6个条件：健康强壮的精子、成熟漂亮的卵子、柔软通畅的输卵管、适宜受精卵着床的宫腔环境、精子卵子合适的时间相遇，以及良好的备孕心态。这其中任何一个环节出现问题，都可能引起不孕，导致备孕失败。

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女方不孕的原因>

一、排卵障碍>

卵子没有正常发育，或者是产生卵子的卵巢出现功能性问题，卵子无法从卵巢中排出等现象就叫做排卵障碍。排卵是受孕的第一步，无法排卵，精卵就不能相遇结合成为受精卵，从而无法怀孕。

多囊卵巢综合征、高泌乳素血症、小卵泡排卵、未破裂卵泡黄素化综合征，是女性排卵障碍中常见的病症。

二、输卵管的内忧外患>

输卵管在孕育新生命这件事情上，承担着至关重要的职责，不仅要负责"捡拾卵子"，给精卵的结合提供场地；还要把受精卵成功地送入子宫。

急性输卵管炎、子宫内膜异位症、输卵管管腔纤维闭塞等导致的输卵管堵塞;盆腔手术、其他盆腔炎性疾病导致的盆腔粘连，，输卵管伞端无法正常拾卵，是导致输卵管不孕的主要原因。

三、子宫问题>

子宫的主要作用是承载胚胎和胎儿发育，我们可以把它看成胚胎和胎儿的家。如果子宫出现某种问题，留不住胚胎，怀孕自然无法成立。

子宫畸形、子宫腺肌症、子宫内膜炎等，都会导致子宫环境变差，影响怀孕。

男方不孕的原因>

男方不孕的因素主要是精子的问题：

一、精子不够强壮>

女性排卵后，卵子就在输卵管中等待着与精子相遇，这对于小小的精子来说，不亚于"万里长征"。想要精子能够找到卵子并与其顺利完成受精，需要足量的健康、有活力的精子。标准的精液中，每毫升应存在4000-8000 万个精子，如果精子低于这个数量标准且运动能力低下，就会成为不孕的原因。

无精症、少精症、精子无力症、精子畸形症，是导致精子不够强壮的4种类型。

二、精子运输障碍>

即使睾丸里生成了精子，结果精子的运送途径即精路出现了问题，那么精子就不能被运动到前端，造成精液中没有精子，比如闭塞性无精子症、逆行射精或者附察炎。这种情况下，女方也是无法受孕的。

除了以上，不孕的因素还包括女方的宫颈问题、外阴与阴道问题、免疫问题，男方的免疫问题等，甚至包括双方精神方面的问题。知道了造成不孕的因素后，去医院做不孕检查时配合医生，才能高效地查出病因。

遵循夫妻同检的原则>

不孕的各种因素中，男女双方可以说是各占一半，因此检查时双方一定要同时去医院进行检查，避免本来能查到的病因，无法及时查明。

一、男方首先进行精液检查>

精液检查是男方最重要的检查，且简单易行，无创伤，因此应该首先进行。为了确保检查的准确性，精液检查最好在排精后的3-7天内进行。

二、女方首先进行排卵检测>

常用的监测排卵方法有激素的测定、基础体温测定（BBT）、经阴道超声动态排卵监测等。女方可在月经的2-4天抽血进行性激素检查，评估卵巢的功能。而周期性、连续的基础体温测定，则可以判别女性是否有排卵，以及了解黄体功能。

三、其次盆腔的妇科检查>

对不孕症夫妇全面和有针对性的体检非常重要，盆腔妇科检查，包括双合诊或三合诊，可以详细地了解到女性阴道、卵巢、子宫等器官的情况。

四、最后进行输卵管通畅度的检测>

输卵管的发病率很高，但是检查方法相对来说比较简单，到目前为止，还是认为子宫输卵管造影是最好的检查。检查时间要求在月经干净后的3-7天进行。

以上4步检查完后，医生基本可以对夫妻双方不孕的病因进行分类和归纳。如果以上4步完成以后，均未发现问题，则初步诊断为不明原因不孕，这并不是意味着没有原因，只是用现有的标准化不孕评估手段找不到发病原因。

其实不孕症并不可怕，在遇到问题时，夫妻一定要共同面对，第一时间寻求医生的帮助，现在第三代试管婴儿技术已经日渐成熟，夫妻双方要给彼此最大的信任及信心，一定会早日抱上宝宝~

最后祝愿大家早日圆健康宝宝梦~

ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。

样本制备指南

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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品

2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。

其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。

4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。

其余方法：

对于

：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。

对于

：离心收集细胞，以2×10

细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10

细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。

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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：

稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；

稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；

稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；

每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。

05

若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

06

若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

07

某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

08

对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。